肉的宰后嫩化关键归因于肌原钎维组成部分的破环，肌原钎维组成部分是由内源性蛋清酶电离酶光生物降解肌原钎维和神经元骨架蛋清酶带来的。与几十块年来一直以来都是关注公众号视角的钙蛋清酶酶不相同，胱天蛋清酶酶（caspases）之前成了感业余爱好的时候题。胱天蛋清酶酶在神经元凋亡的下达价段起着至关首要的功用，在当中caspase-3在生前蛋清酶电离中的功用是各个面和复杂的的，故此不错进1步科学科学试论。S-亚硝基化根据调整钙尽情释放、体力新陈代谢、蛋清酶质光生物降解和神经元凋亡来调整色泽，包扩嫩度和持水技能。之前科学科学试论显示S-亚硝基化能下降依懒线粒体的caspase-3级联症状，这已经是背部肌肉神经元凋亡和牛羊肉品性变现的现象。caspase-3的科学科学试论内容是其与神经元凋亡的问题，以至于，通常很少有科学科学试论试论S-亚硝基化调整caspase-3的长效机制。

2024年9月由合肥渔业大家张万刚院士团队合作在期刊Journal of Agricultural and Food Chemistry发表题为“Exploring the Effects of S‑Nitrosylation on Caspase‑3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro”文章，研究发现了GSNO处理后caspase-3的活性显著降低（P < 0.05），并表现出剂量依赖性的抑制作用，其在半胱氨酸116、170、184、220和264位点被S-亚硝基化，进一步抑制了其对牛肉肌原纤维蛋白的蛋白水解能力。拜谱菌物为该研究提供了亚硝基化淡化组学拜谱生物，助力发现目的蛋白上的亚硝基化修饰位点。

繁体中文关键词：体外研究S-亚硝基化对牛肉Caspase-3修饰和肌原纤维降解的影响

期刊论文：Journal of Agricultural and Food Chemistry

2023年损害要素：5.7

说出耗时：2024年9月

玩家计量单位：南京农业大学

深入分析素材：蛋白

拜谱能提供技术工艺：亚硝基化修饰组学

的技术交通路线：

一、探析可是

01.Caspase-3活力

当今尚不明确NO对caspase-3的抑生产制的作用的作用是不是归因于NO介导的S-亚硝基化，有差异溶液浓度梯度方向的GSNO作外源性NO批售，以诱骗caspase-3的休外S-亚硝基化。数据反映出，与并没有GSNO的组比起，100、200和400μM GSNO组的caspase-3活性酶氧更为明显缩减（图1），与原本通讯稿一样。GSNO办理缩减caspase-3活性酶氧的潜在性的缘故仍欠缺体现了。

图1 不同于浓度值的GSNO加工处理对caspase-3几丁质酶的反应

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

02.Caspase-3的S-亚硝基化水平

深入分析Caspase-3的亚硝基化成度，以阐发GSNO对Caspase-3的想法性。经GSNO外理后，检验到caspase-3核蛋白S-亚硝基化抗弯强度曾加（图2）。这部分結果表面，外源性GSNO培植可顺利诱导型caspase-3的身体之外S-亚硝基化。最令难以相信的是，在不能GSNO存在的的参考组中检验到同一个绚烂的S-亚硝基化带，这表面caspase-3能够发现内源性的S-亚硝基化。那么，本深入分析中caspase-3的S-亚硝基化成度较高，而caspase-3的活力性降底，这与前面的深入分析同步。那么，caspase-3的特女性朋友S-亚硝基化表达位点尚不看清楚，还应该进一歩的摸索。

图2 GSNO办理对caspase-3S-亚硝基化平均水平的会影响

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

03.Caspase-3的S-亚硝基化位点

通过亚硝基化修饰语组学检测caspase-3的S-亚硝基化位点。结果表明，caspase-3上的4个多肽中有5个半胱氨酸残基被蛋白S-亚硝基化修饰（图3）。亚硝基化半胱氨酸定位于SSFVCVLLSHGEEGIIFGTNGPVDLK,GTELDCGIETDSGVDDDMACHKIPVEADFLYAYSTAPGYYSWR,DGSWFIQSLCAMLK和KQIPCIVSMLTK的多肽中，分别位于116、170、184、220和264位。S-亚硝基化caspase-3多肽的MS1和MS2光谱显示Caspase-3是一种具有8个半胱氨酸残基的半胱氨酸蛋白酶，其中5个半胱氨酸被发现被亚硝基化，说明Caspase-3易受亚硝基化修饰（图4）。此外，据先前报道casase-3的催化残留亚硝基化Cys163，这不同于本研究的结果。S-亚硝基化caspase-3的丰度、位点的修饰水平和检测方法的灵敏度的差异可能是导致结果不一致的原因之一。可以推断，半胱氨酸蛋白酶活性的调节可能是由NO和蛋白S-亚硝基化介导的，这可能影响蛋白降解，促进死后衰老。

图 3 caspase-3的字段。蓝色的标注的字段带表S-亚硝基化肽，橙红色标注的C带表S-亚硝基化半胱氨酸

(图源：Hou, Qin et al., JAgric Food Chem.. 2024)

图4. s-亚硝基化肽和caspase-3位点的MS1和MS2光谱仪

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

04.S-亚硝基化Caspase-3吸附结蛋白酶

结蛋清当做种首要的癌细胞膜骨架蛋清，在保护肌癌细胞膜格局的格局全版性和抽缩性部分起着首要功用，研发S-亚硝基化caspase-3对结蛋清降解塑料塑料的强烈性具备首要意议。与Std（未用胱天蛋清酶-3和GSNO孵育的初使肌棉纤维素蛋清）组相信，0 μM GSNO组（肌原棉纤维素和caspase-3的孵育，无GSNO）的全版结蛋清量相关系数有效降低，警告caspase-3对结蛋清具备潜在性的蛋清核蛋清质质水解业务能力。在GSNO孵育后，全版结蛋清的量严重增大（P < 0.05）。不仅如此，当GSNO量增大时，全版结蛋清的量不断地上涨（P < 0.05）（图5）。哪一找到发现，SNO淡化的caspase-3以的水平依赖关系的习惯抑制性结蛋清的降解塑料塑料。

图5.S-亚硝基化caspase-3化学降解结淀粉酶

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

05.S-亚硝基化Caspase- 3生物降解肌钙蛋白质-T

肌钙血清-T (TnT)是原肌球血清调低负责任肌群收縮的丝条的一定肌原玻璃弹性纤维材料血清。TnT的光化学吸附特证是加测到28和30 kDa的TnT。在亚硝基化必要条件下，caspase-3对TnT的光化学吸附状态如图甲提示6提示，与Std组（不含有caspase-3和GSNO的肌原玻璃弹性纤维材料）对比，caspase-3组中30 kDa TnT场面描写特殊增添，阐明caspase-3参与性了TnT的光化学吸附，除此以外，caspase-3与GSNO的孵育形成30 kDa TnT增涨。在100和200 μM GSNO组期间就没有加测到显眼的不一致性(P > 0.05)，而当GSNO的渗透压达标400 μM 时，该场面描写特殊变少(P < 0.05)。这部分发现了阐明了SNO体现的caspase-3对TnT光化学吸附的仰加工用。结血清和TnT是caspase-3的皮肤敏感底物，而GSNO正确处理调低caspase-3的灵亲水性应该形成肌原玻璃弹性纤维材料血清光化学吸附的情况调低。由此可见提出的，NO诱骗的S-亚硝基化会采用体现半胱氨酸残基来调低caspase-3的灵亲水性，行而进步引响其对结血清和TnT的血清溶解效率，而引响牛羊肉产品质量。

图6. S-亚硝基化caspase- 3光降解肌钙蛋清-T

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

二、总结ppt

本钻研广泛宣传试论S-亚硝基化对caspase-3掩盖的决定以及很快对鸡肉肌原合成纤维棉体内生物降解的决定。蛋清S-亚硝基化能够掩盖caspase-3的半胱氨酸残基，故而引发caspase-3活力性调低，进一部减缓了其对鸡肉肌原合成纤维棉蛋清的蛋清淀粉水解力量。

三、拜谱工作小结

理论设计选用了酶活校正，亚硝基化呈现组学阐述，WB等探测方法，发掘血清酶S-亚硝基化能呈现caspase-3的半胱氨酸残基，这形成了caspase-3可溶性的消减，并举这一步治理和改善了其对牛羊肉肌原玻璃纤维血清酶的血清酶水解反应性能。本理论设计为定义血清酶质亚硝基化对肉嫩的调整策略提供了没事个新的视觉。

拜谱生物作为一家国内领先的多组学服务公司，可提供完善成熟的高淀粉酶质组学、表达高淀粉酶质组学、代谢转化组学、转录组学等多组学产品技术服务体系，整合多组学数据进行深入挖掘分析，全面解析机制机理等，助力高分文章发表。除此之外，拜谱生物还可提供半胱氨酸系列拜谱生物物品，包括亚硝基化、谷胱甘肽化、硫巯基化、次磺碱化、total硫化呈现、矿酸巯基，欢迎大家咨询！

考生论文资料：

Qin Hou, Chao Ma, Rui Liu, Zhuangli Kang, and Wangang Zhang.Exploring the Effects of S-Nitrosylation on Caspase-3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro. Journal of Agricultural and Food Chemistry. doi.org/10.1021/acs.jafc.4c06663